Coriell Institute細胞的實驗注意事項和培養操作介紹

　　Coriell Institute細胞凍存和復蘇實驗原理：細胞凍存及復蘇的基本原則是慢凍快融，可以保存細胞活力，目前細胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護劑，這兩種物質能提高細胞膜對水的通透性，加上緩慢冷凍可使細胞內的水分滲出細胞外，減少細胞內冰晶的形成，從而減少由于冰晶形成造成的細胞損傷。

        細胞應采用快速融化的方法，這樣可以保證細胞外結晶在很短的時間內即融化，避免由于緩慢融化使水分滲入細胞內形成胞內再結晶對細胞造成損傷。

　　一、細胞凍存和復蘇實驗注意事項：

　　1、從增殖期到形成致密的單層細胞以前的培養細胞都可以用于凍存。

　　2、將凍存管放入液氮容器或從中取出時，要做好防護工作，以免凍傷。

　　3、凍存和復蘇用新配制的培養液。

　　二、Coriell Institute細胞培養操作：

　　1、復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜，換液并檢查細胞密度。

　　2、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

　　3、棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

　　4、加1ml消化液于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。

　　5、按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。

　　6、待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。